众所周知,血脂异常是冠心病和缺血性脑卒中的独立危险因素之一,血脂测定是血脂异常检出和治疗效果评价的重要手段。
3 血脂测定的方法学与标准化
3.1血脂测定的方法学
目前国内建议临床实验室采用胆固醇氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(CHOD-PAP法)、甘油磷酸氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(GPO-PAP法)分别作为测定血清TC、TG的常规方法[2,8]。一般临床实验室可采用一步GPO-PAP法,有条件的实验室(如三级以上医院)应考虑开展游离甘油(FG)的测定或采用两步酶法。因为有些异常或病理情况下如应激反应(肾上腺素激活LPL促进体内脂肪水解),剧烈运动,服用含甘油的药物如硝酸甘油,静脉输入含甘油的营养液,肝素治疗,某些严重的糖尿病、肝病与肾病,取血器材或试管塞上带有甘油等时,可见血清FG显著升高,并给临床决策带来误导。因此,需要注意血清FG对TG测定结果的影响。
通常需根据各种脂蛋白的密度、颗粒大小、电荷等应用超速离心法、色谱法、电泳法、化学或免疫沉淀法将HDL、LDL与其他脂蛋白分离开,测定HDL或LDL组分中胆固醇含量(HDL-C或LDL-C)。目前建议用双试剂的直接匀相测定法(homogeneous method)作为临床实验室测定血清HDL-C、LDL-C的常规方法[2,8] 。可供选择的测定HDL-C方法主要有:清除法(Clearance method)包括反应促进剂-过氧化物酶清除法(synthetic polymer/detergent HDL-C assay,SPD法)和过氧化氢酶清除法(catalase HDL-C assay,CAT法),PEG修饰酶法(PEG-modified enzyme HDL-C assay,PEGME法),选择性抑制法(polyanion polymer/ detergent HDL-C assay,PPD法),免疫分离法(immunoseparation method, IS法)包括PEG/抗体包裹法(International Reagents Corp HDL-C assay,IRC法)和抗体免疫分离法(antibody immunoseparation HDL-C assay ,AB法)。以前3类方法为目前国内临床实验室最常用。可供选择的测定血清LDL-C的方法主要有:表面活性剂清除法(surfactant LDL-C assay,SUR法),过氧化氢酶清除法(catalase LDL-C assay,CAT法),可溶性反应法(solubilization LDL-C assay,SOL法),保护性试剂法(protecting reagent LDL-C assay,PRO法)和杯芳烃法(calixarene LDL-C assay,CAL法)。以前3类试剂为国内临床实验室最常用。
目前尚无公认的血清apoAI、apoB 和Lp(a)测定的参考方法。目前建议免疫浊度法[包括免疫散射比浊法(immunonephelometry,INA)和免疫透射比浊法(immunoturbidimetry,ITA)]作为临床实验室测定血清apoAⅠ、apoB和Lp(a)的常规方法,首选ITA法,其次为INA法[2,8] 。
3.2 血脂测定的参考系统
目前美国已建立较完整的TC、TG测定的参考系统,其决定性方法都是由美国国家标准与技术研究所(NIST)建立的核素稀释-质谱法(ID-MS法)。HDL-C、LDL-C目前暂没有决定性方法和一级参考物质,只有参考方法和二级参考物质。apoAⅠ、apoB和Lp(a)测定的标准化问题非常复杂,目前尚无公认的决定性方法与参考方法,仅CDC建立了一个apoAⅠ测定的HPLC-MS候选决定性方法。表2为目前国内外公认的血脂与脂蛋白分析参考系统[8] 。
(责任编辑:实习陈碎银)
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